Resultado da pesquisa (21)
Termo utilizado na pesquisa Mycobacterium bovis
#1 - Prevalence of bovine tuberculosis: A systematic review and meta-analysis
Abstract in English:
Bovine tuberculosis is a zoonotic disease with global distribution. This study aimed to describe its prevalence in cattle through a systematic review and meta-analysis of studies conducted all around the world. The research consisted of a systematic literature review following the precepts of the Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analyses (PRISMA) methodology. Cross-sectional studies that described the prevalence of the disease using the diagnostic method through an intradermal test with bovine and avian purified protein derivative (PPD) were selected. Identifying articles was performed in the PubMed, ScienceDirect, Scopus, and Web of Science databases. Of the total number of studies found (n=1,839), 60 met all criteria and were included in this review. The overall prevalence was 3.27% (2.11–5.05%) for animals and 18.09% (11.20–27.90%) for herds. Analysis of risk factors for tuberculosis in cattle was found or performed in 50 studies. The heterogeneity identified among the works included was expected, given the differences in research design, year of publication, and the number of animals sampled. It is necessary to evaluate the insertion of new ante mortem diagnostic tests into control and eradication programs, which, combined with allergic tests, may identify the largest number of animals that presented an actual positive for the disease.
Abstract in Portuguese:
A tuberculose bovina é uma doença zoonótica com distribuição global. O objetivo do presente trabalho foi descrever a prevalência da enfermidade em bovinos através de uma revisão sistemática e meta-análise em estudos realizados no mundo. A pesquisa consistiu em uma revisão sistemática de literatura seguindo os preceitos da metodologia “Preferred Reporting Items for Systematic Reviews and Meta-Analyses” (PRISMA). Estudos transversais que descreveram a prevalência da enfermidade utilizando o método de diagnóstico através da prova intradérmica com derivado proteico purificado (PPD) bovino e aviário foram selecionados. O processo de identificação dos artigos foi desenvolvido nas bases de dados PubMed, ScienceDirect, Scopus e Web of Science. Do total de estudos encontrados (n=1.839), 60 atenderam a todos os critérios e foram incluídos na presente revisão. A prevalência geral encontrada foi de 3,27% (2,11–5,05%) para animais e 18,09% (11,20–27,90%) para rebanhos. Análises de fatores de riscos para a tuberculose em bovinos foi encontrada ou realizada em 50 estudos. A heterogeneidade identificada entre os trabalhos incluídos nesta revisão era esperada tendo em vista as diferenças relacionadas aos desenhos de pesquisa, anos de publicação dos estudos e a quantidade de animais amostrados. É necessária a avaliação da introdução de novos testes de diagnóstico ante-mortem aos programas de controle e erradicação que, combinados com os testes alérgicos, possam identificar o maior número de animais verdadeiramente positivos para a enfermidade.
#2 - Indirect ELISA as a complementary diagnostic method of bovine tuberculosis
Abstract in English:
Bovine tuberculosis is an economic and health problem, requiring precise diagnostic methods for its control and eradication. The aim of this study was to evaluate the performance of a commercial enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test for the diagnosis of bovine tuberculosis. A total of 1,644 cattle from eight dairy herds were evaluated using the comparative cervical tuberculin test (CCTT). Three of the herds had no recent tuberculosis infection, and the other five had shown positive results in a previous tuberculin test. For the serological diagnosis of tuberculosis, a commercial ELISA antibody test kit for Mycobacterium bovis was used. Serum samples from 846 cattle from the eight herds were evaluated using ELISA for M. bovis. Animals that were positive based on either CCTT or ELISA for M. bovis or both were sent to slaughter. Samples of their lungs, livers, and lymph nodes were collected and stored under refrigeration for microbiological culture and subsequent confirmation by polymerase chain reaction. Samples from the same tissues were also fixed with 10% formaldehyde in bottles for histopathological examination and stained with hematoxylin and eosin (HE). Of the 1,644 cattle, 61 were considered positive and 65 inconclusive based on CCTT. Retesting of the inconclusive samples identified an additional 19 positive cases, totaling 80 (4.8%) CCTT-positive animals from five herds. ELISA for M. bovis identified 4.2% (36/846) positive cattle, of which 35 were considered negative and one inconclusive based on CCTT. Of the 36 positive cases identified by ELISA for M. bovis, 27 were euthanized, 11% (3/27) showed suggestive lesions of tuberculosis on macroscopic examination, and two were confirmed by histological, microbiological, and PCR methods. The weak association of ELISA for M. bovis with the results obtained by macroscopic, histological, and microbiological isolation indicates the fragility of ELISA performance in field conditions. Therefore, it is suggested that its use as a complementary method for herd sanitation be based on the local epidemiological situation.
Abstract in Portuguese:
A tuberculose bovina é um problema econômico mundial e de saúde, que requer métodos de diagnóstico precisos para controle e erradicação. Objetivou-se com este estudo avaliar o desempenho de um teste comercial de ELISA no diagnóstico da tuberculose bovina. Foram avaliados pelo teste cervical comparativo (TCC) 1644 bovinos, provenientes de oito rebanhos de exploração leiteira, sendo três deles sem histórico recente da doença, e outros cinco com resultados positivos no último exame de tuberculinização. Para o diagnóstico sorológico da tuberculose utilizou-se um kit comercial de ELISA Mycobacterium bovis antibody test (ELISA M. bovis). Amostras de soro sanguíneo de 846 bovinos provenientes dos mesmos rebanhos foram também avaliadas no ELISA M. bovis. Os bovinos positivos no TCC e/ou ELISA M. bovis foram encaminhados para o abate sanitário. Dos positivos no ELISA para M. bovis foi realizado o exame macroscópico das carcaças e classificação das mesmas em: com presença ou ausência de lesões. Amostras de pulmão, fígado, e linfonodos, foram colhidas em duplicata para realização dos exames de cultivo microbiológico com posterior confirmação por PCR, e exame histopatológico com coloração de hematoxilina e eosina (HE). Dos 1,644 bovinos, 61 foram considerados positivos e 65 inconclusivos no TCC. O reteste dos inconclusivos identificou mais 19 positivos. No total, 80 (4,8%) bovinos positivos no TCC, provenientes de 5 rebanhos foram encaminhados para abate. O ELISA para M. bovis identificou 4,2% (36/846) de bovinos positivos, sendo 36 considerados negativos e um inconclusivo no exame de tuberculinização. Dos positivos no ELISA para M. bovis, 27 foram eutanasiados, e no exame macroscópico das carcaças 11% (3/27) dos animais apresentaram lesões sugestivas de tuberculose, e em apenas dois houve confirmação da doença pelos métodos histológico, microbiológico e PCR. A baixa associação dos resultados obtidos no ELISA para M. bovis com os exames macroscópico, histológico e isolamento microbiológico apontam para a fragilidade do desempenho do ELISA para o diagnóstico de tuberculose. Sugere-se assim que seu uso como método complementar para saneamento de rebanhos, seja adotado com cautela e considere a situação epidemiológica local.
#3 - Bovine tuberculosis in safari park in Brazil
Abstract in English:
Bovine tuberculosis (bTB) is an infectious disease caused by Mycobacterium bovis, affecting domestic animals, wild animals and humans. In captivity, for wild animals, bTB represents a risk to animal keepers and zoo visitors, in addition to the possibility of spreading the infection to domestic animals or through the trade of infected wild animals. Sambar (Cervus unicolor), red deer (Cervus elaphus) and fallow deer (Dama dama) from a safari park in the State of Rio Grande do Sul, Brazil, showed a clinical condition of dyspnea and weight loss. Some animals died and showed lesions suggestive of tuberculosis (LST), which were confirmed by histopathology. After the interdiction of the safari park by the state veterinary authorities, 281 deer were euthanized with the authorization of the “Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis” (IBAMA). Retropharyngeal and submandibular lymph nodes and viscera were collected from 21 animals, which were grown in Stonebrink medium for up to 90 days. After DNA extraction from the bacterial colonies, PCR was performed for targets flanking the region of differentiation 4 (RD4). Of the 21 samples, 14 (66.7%) presented LST with a granulomatous appearance, a whitish coloration, and caseous or calcified consistency, and seven samples (33.3%), showed no lesions. In the culture of 14 samples with LST, 13 (92.8%) presented bacterial growth compatible with M. bovis. In the cultivation of the seven samples without LST, four (57.1%) presented colonies compatible with M. bovis. PCR and DNA sequencing of the PCR amplicons detected as positive all the 17 (100%) bacteriological cultures suggestive of M. bovis, thus confirming the outbreak of bTB in deer. Decisions about positive tested and suspicious animals should be taken based on the evaluation of the risk of transmission to the rest of the zoological animals, animal welfare, conservation considerations and, the zoonotic potential of this pathogen.
Abstract in Portuguese:
A tuberculose bovina (bTB) é uma doença infecciosa causada por Mycobacterium bovis, afetando animais domésticos, animais selvagens e humanos. Para animais selvagens em cativeiro, a bTB representa um risco para os tratadores de animais e visitantes do zoológico, além da possibilidade de espalhar a infecção para animais domésticos ou por meio do comércio de animais silvestres infectados. Cervídeos sambar (Cervus unicolor), veado-vermelho (Cervus elaphus) e gamo (Dama dama) de um parque safári no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil, mostraram uma condição clínica de dispneia e perda de peso. Alguns animais morreram e apresentaram lesões sugestivas de tuberculose (LST), as quais foram confirmadas por histopatologia. Após a interdição do parque safári pelas autoridades veterinárias estaduais, 281 veados sofreram eutanásia com a autorização do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis (IBAMA). Os linfonodos retrofaríngeos e submandibulares e vísceras foram coletados de 21 animais, que foram cultivados em meio Stonebrink por até 90 dias. Após extração de DNA das colônias bacterianas, foi realizada PCR para alvos que flanqueavam a região de diferenciação 4 (RD4). Das 21 amostras, 14 (66,7%) apresentaram LST com aspecto granulomatoso, coloração esbranquiçada e consistência caseosa ou calcificada, e sete amostras (33,3%) não apresentaram lesões. Na cultura de 14 amostras com LST, 13 (92,8%) apresentaram crescimento bacteriano compatível com M. bovis. No cultivo das sete amostras sem LST, quatro (57,1%) apresentaram colônias compatíveis com M. bovis. A PCR e o sequenciamento de DNA dos fragmentos de PCR detectaram como positivo todas as 17 (100%) culturas bacteriológicas sugestivas de M. bovis, confirmando assim o surto de bTB em cervídeos. As decisões sobre animais positivos testados e suspeitos devem ser tomadas com base na avaliação do risco de transmissão para o restante dos animais zoológicos, bem-estar animal, considerações de conservação e no potencial zoonótico desse patógeno.
#4 - Spoligotyping, genotyping, and spatial distribution of Mycobacterium bovis in cattle in the state of Bahia, Brazil
Abstract in English:
Mycobacterium bovis is responsible for bovine and buffalo tuberculosis, an important zoonotic disease with global distribution. The knowledge of the distribution and the precise identification of this disease, including advanced diagnoses such as spoligotyping, allows choosing the best strategies to fight the disease’s progress. The present work aimed to investigate mycobacteria’s presence, genotype their strains, and evaluate tuberculosis cases’ spatial distribution from suggestive lesions in carcasses of bovine and buffalo inspected in slaughterhouses under an official inspection regime in the state of Bahia, Brazil. The study investigated 453,417 animals. Among these, 31 (0.007%) from 17 municipalities were suspected of tuberculosis. Among the culture medium growth, 95% of these were categorized as alcohol-acid resistant bacilli (BAAR). All isolates were subjected to spoligotyping and 95% were confirmed as M. bovis (SB0120, SB0121, SB0852, SB0828, SB0295, SB0881, SB1648, SB6119, SB0140, SB1055). The strain SB0120 was the most prevalent, and this profile has been described in cases of human tuberculosis by M. bovis, highlighting the zoonotic potential of this profile. This study also identified strains never reported in Bahia, highlighting a distinctive pattern from other parts of Brazil, besides mixed infections. Besides, to identify strains never before described in the state, highlighting a distinctive pattern in Brazil (SB6119 and SB0852, respectively). An unpublished profile was identified and inserted in the international database (Mbovis.org), named SB2715.
Abstract in Portuguese:
O Mycobacterium bovis é o responsável pela tuberculose bovina e bubalina, doença zoonótica importante e com distribuição global. O conhecimento da distribuição e a identificação precisa dessa enfermidade, incluindo diagnósticos mais avançados como o spoligotyping, permite escolher as melhores estratégias de combate ao avanço da doença. O presente trabalho objetivou investigar a presença de micobactérias, genotipar suas estirpes e avaliar a distribuição espacial dos casos de tuberculose a partir de lesões sugestivas nas carcaças de bovinos e bubalinos inspecionadas em frigoríficos sob regime de inspeção oficial no estado da Bahia. Foram investigados 453.417 animais dentre os quais 31 (0,007%) foram suspeitos de doença e provenientes de 17 municípios. Após o crescimento em meio de cultura, 95% foram categorizados como bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR). Todos os isolados foram submetidos à spoligotyping e 95% foram confirmados M. bovis (SB0120, SB0121, SB0852, SB0828, SB0295, SB0881, SB1648, SB6119, SB0140, SB1055). A cepa SB0120 foi a mais prevalente e este perfil vem sendo descrito na literatura com casos de tuberculose humana por M. bovis ressaltando o potencial zoonótico deste perfil. Este estudo também identificou cepas nunca relatadas no estado da Bahia, destacando um padrão distinto de outras partes do Brasil, além da existência de infecções mistas. Permitiu ainda relatar linhagens nunca antes descritas no estado com destaque para um padrão novo no Brasil (SB6119 e SB0852 respectivamente). Um perfil inédito identificado foi identificado e inserido no banco de dados internacional (Mbovis.org), nomeado SB2715.
#5 - Isolation and genotyping of Mycobacterium bovis in suggestive lesions of tuberculosis in cattle slaughtered in the state of Ceará, Brazil
Abstract in English:
Bovine tuberculosis (BTB) is a zoonosis caused by the bacterium Mycobacterium bovis, which induces the development of nodular and granulomatous lesions in various animal tissues. The recognition of these suggestive gross lesions during postmortem sanitary inspection in slaughterhouses provides a presumptive diagnosis, which requires the use of complementary tests to confirm the disease. This study aimed to verify the occurrence of BTB in cattle slaughtered in slaughterhouses in the state of Ceará, Brazil, using bacteriological and molecular methods. To this end, suggestive lesions were analyzed on carcasses condemned by the “Serviço de Inspeção Estadual” (SIE). The samples were submitted to microbiological analysis using culture media and specific staining followed by spoligotyping molecular technique for identification and genotyping of the mycobacteria. Occurrence of lesions suggestive of BTB was verified in bovine carcasses (0.071%) from different municipalities of the state. These lesions were located mainly in the lung (95.12%), lymph nodes (58.53%), and liver (36.58%). Microbiological culture showed bacterial isolation (17.94%), with the growth of colonies showing morphological and tannic characteristics belonging to genus Mycobacterium spp. Genetic polymorphism analysis identified M. bovis in all isolates, which were discriminated into six spoligotypes (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870, and SB0852). These profiles have been described in Brazil and several areas of the world, except for profiles SB1064 and SB0852, which were described in the country for the first time. The results show that the association of the diagnostic methods used was the basis for the first study on identification of mycobacteria found in the state, which may provide a database for the epidemiological study of BTB in the state of Ceará.
Abstract in Portuguese:
A tuberculose bovina (TB) é uma zoonose causada pelo Mycobacterium bovis, o qual induz ao desenvolvimento de lesões nodulares e granulomatosas em vários tecidos do animal. O reconhecimento dessas lesões macroscópicas sugestivas durante a inspeção sanitária post mortem em matadouros fornece um diagnóstico presuntivo, sendo necessário a utilização de testes complementares para confirmação da doença. O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência da TB em animais abatidos em matadouros-frigoríficos no estado do Ceará através da utilização de métodos bacteriológicos e moleculares. Para tanto, foram analisadas lesões sugestivas de TB em carcaças condenadas pelo Serviço de Inspeção Estadual (SIE). As amostras foram submetidas à análise microbiológica, utilizando meios de cultivo e de coloração específicos, seguida pela técnica molecular spoligotyping para identificação e tipificação genética da micobactéria. Verificou-se a ocorrência de lesões sugestivas de TB em carcaças bovinas (0,071%) oriundas de diferentes municípios do estado do Ceará. Essas lesões estavam localizadas principalmente no pulmão (95,12%), linfonodos (58,53%) e fígado (36,58%). O cultivo microbiológico obteve isolamento bacteriano (17,94%), com o crescimento de colônias apresentando características morfológicas e tintoriais pertencentes ao gênero Mycobacterium spp. A análise do polimorfismo genético identificou a presença de M. bovis em todos os isolados, que foram discriminados em seis espoligotipos (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870 e SB0852), descritos no Brasil e em diversas áreas do mundo, exceto os perfis SB1064 e SB0852 que foram descritos pela primeira vez no país. Os resultados obtidos demonstram que a associação dos métodos diagnósticos utilizados foram a base do primeiro estudo de identificação das micobactérias encontradas no estado do Ceará, o que pode contribuir para a criação de um banco de dados para o estudo epidemiológico da TB no estado.
#6 - Mycobacteriae diagnosed in domestic cats in the backland of Paraiba, Brazil
Abstract in English:
This report describes two cases of domestic cats infected with Mycobacterium sp. in the backland of Paraiba, Northeast Brazil. The animals manifested nonspecific clinical signs, characterized by progressive weight loss, dyspnea, cough and generalized lymphadenomegaly in one cases, and clinical evolution of one and seven months respectively. Macroscopically the lesions were restricted to superficial and/or deep lymph nodes and pulmonary parenchyma, characterized by multifocal or multifocal to coalescent, yellowish and irregular nodules that presented multifocal areas with yellowish, friable and caseous as well as multifocal to coalescent, white and firm areas. Histologically, it was observed lymphadenitis and granulomatous pneumonia in both cases, varying in intensity of inflammatory response and degree of mineralization. The granulomas were constituted by macrophages and epithelioid cells, some with marked necrosis and central mineralization, surrounded by a large amount of connective tissue. In the first case there were also discrete and random granulomatous hepatitis. In both cases alcohol-acid-resistant bacilli were visualized inside the cytoplasm of macrophages in Ziehl-Neelsen staining; there was immunostaining for Mycobacterium sp. in the cytoplasm of macrophages. Through PCR was identified only the genus Mycobacterium in Case 1, and Mycobacterium bovis in Case 2. The diagnosis of Mycobacterium sp. In the cats was performed based on anatomopathological findings and immunohistochemistry. The PCR was performed the etiological diagnosis of mycobacteriosis in Case 1 and tuberculosis by M. bovis in Case 2. The diagnosis of diseases caused by mycobacteria in cats, especially those in which M. bovis was involved, is extremely important for public health highlighting the zoonotic potential of this species, since many infected animals may be asymptomatic or show nonspecific clinical signs.
Abstract in Portuguese:
Descrevem-se dois casos de infecção por Mycobacterium sp. em gatos domésticos no sertão da Paraíba, Nordeste do Brasil. Os animais apresentavam emagrecimento progressivo, dispneia, tosse e linfadenomegalia generalizada em um dos casos, com evolução clínica de um e sete meses, respectivamente. Macroscopicamente as lesões estavam restritas aos linfonodos superficiais e/ou profundos e parênquima pulmonar, caracterizadas por nódulos multifocais ou multifocais a coalescentes, amarelados, irregulares que ao corte apresentavam áreas multifocais a coalescentes amareladas, friáveis e caseosa, além de áreas multifocais brancacentas e firmes. Histologicamente, verificou-se linfadenite e pneumonia granulomatosa caracterizada por áreas centrais de necrose e mineralização central circundadas por macrófagos, células epiteliais e tecido conjuntivo fibroso. No primeiro caso havia ainda hepatite granulomatosa discreta e aleatória. Em ambos os casos, foram visualizados bacilos álcool-ácido resistentes livres e no citoplasma de macrófagos na coloração de Ziehl‑Neelsen. Houve imunomarcação para Mycobacterium sp. no citoplasma de macrófagos em ambos os casos. Na PCR, identificou-se apenas o gênero Mycobacterium no Caso 1 e Mycobacterium bovis no Caso 2. O diagnóstico de infecção por Mycobacterium sp. nos felinos foi realizado com base nos achados anatomopatológicos e imuno-histoquímica. Pela PCR foi realizado o diagnóstico etiológico de micobacteriose no Caso 1 e tuberculose por M. bovis no Caso 2. O diagnóstico das doenças causadas por micobactérias em felinos, principalmente aquelas em que M. bovis esteja envolvido, é de extrema importância para a saúde pública, destacando o potencial zoonótico desta espécie, pois muitos animais infectados podem ser assintomáticos ou apresentarem sinais clínicos inespecíficos.
#7 - False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis, 37(12):1380-1384
Abstract in English:
ABSTRACT.- Rodrigues R.A., Meneses I.I.F.S., Jorge K.S.G., Silva M.R., Santos L.R., Lilenbaum W., Etges R.N. & Araújo F.R. 2017. False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1380-1384. Embrapa Gado de Corte, Av. Rádio Maia 830, Campo Grande, MS 79106-550, Brazil. E-mail: flabio.araujo@embrapa.br
According to the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT), the routine tests for the diagnosis of bovine tuberculosis in the country are the simple intradermal tuberculin test (SITT) of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the caudal fold test and the comparative intradermal tuberculin test (CITT). The latter is also used as a confirmatory test. A group of 53 animals from three dairy herds in a focal area for bovine tuberculosis, that were submitted to depopulation in the state of Rio Grande do Sul, were submitted to the CITT. Tissues were cultured and the resulting colonies were confirmed by PCR and DNA sequencing. Among the 53 animals analyzed using the CITT, 32 (60.4%) were negative, 14 (26.4%) were positive and seven (13.2%) results were inconclusive. The CITT detected 11 of the 39 animals with culture-confirmed M. bovis infection as positive. Among the total of 14 uninfected animals based on cultures, the CBT detected eight as negative. Thus, the CITT demonstrated sensitivity of 28.2% and specificity of 57.1% for the population sampled. A total of 24/32 (75.0%) of the animals with negative CITT results were culture positive (confirmed by PCR) and were considered false negatives based on the CITT. The maintenance of these false-negative animals in herds has serious implications for the control of the disease, since they can be a source of infection. The addition of complementary tests could help identify such animals and increase the odds of diagnostic success.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Rodrigues R.A., Meneses I.I.F.S., Jorge K.S.G., Silva M.R., Santos L.R., Lilenbaum W., Etges R.N. & Araújo F.R. 2017. False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis. [Reações falso-negativas ao teste cervical comparativo para tuberculose bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1380-1384. Embrapa Gado de Corte, Av. Rádio Maia 830, Campo Grande, MS 79106-550, Brazil. E-mail: flabio.araujo@embrapa.br
No Brasil, segundo o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal (PNCEBT), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), os testes de rotina para o diagnóstico de tuberculose bovina são o teste cervical simples (TCC), o teste da prega caudal (TPC) e o teste cervical comparativo (TCC), sendo que o último também é utilizado como teste confirmatório. Um grupo de 53 animais oriundos de três rebanhos leiteiros de área de foco para tuberculose bovina que foram submetidos a vazio sanitário no Rio Grande do Sul foi submetido ao TCC. Os tecidos destes animais foram cultivados e as colônias resultantes confirmadas por PCR e sequenciamento de DNA. Dos 53 animais analisados no TCC, 32 (60,4%) foram negativos, 14 (26,4%) positivos e sete (13,2%) inconclusivos, com base no PNCEBT. O TCC detectou como positivos 11 dos 39 animais com infecção por M. bovis confirmada por cultivo. Do total de 14 animais não infectados, baseado na cultura, o TCC detectou oito como negativos. Assim, o TCC apresentou, para a população amostrada, sensibilidade de 28,2% e especificidade de 57,1%. Um total de 24/32 (75,0%) dos animais negativos ao TCC foi positivo no cultivo (confirmado por PCR), sendo considerados falso-negativos ao TCC. A manutenção destes animais falso-negativos nos rebanhos tem sérias implicações para o controle da enfermidade, já que os mesmos podem ser fonte de infecção. A adição de testes complementares poderia auxiliar na identificação destes animais, aumentando a cobertura diagnóstica.
#8 - Histopathological and molecular diagnosis of lesions suggestive of tuberculosis in buffaloes slaughtered in the municipalities of Macapá and Santana, Amapá state, Brazil, 37(11):1198-1204
Abstract in English:
ABSTRACT.- Pereira J.D.B., Cerqueira V.D., Bezerra Júnior P.S., Oliveira Bezerra D.K., Araújo F.R., Dias A.C.L., Araújo C.P. & Riet-Correa G. 2017. [Histopathological and molecular diagnosis of lesions suggestive of tuberculosis in buffaloes slaughtered in the municipalities of Macapá and Santana, Amapá state, Brazil.] Diagnóstico histopatológico e molecular de lesões sugestivas de tuberculose em búfalos abatidos nos municípios de Macapá e Santana, estado do Amapá. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(11):1198-1204. Universidade Federal do Pará, Rua Augusto Corrêa 1, Bairro Guamá, Castanhal, PA 66075-110, Brazil. E-mail: gabrielariet@pq.cnpq.br
This study aimed to evaluate suggestive lesions of tuberculosis in buffaloes slaughtered in official slaughterhouses in the State of Amapá, Brazil, in order to confirm the diagnosis of tuberculosis by histopathological and molecular evaluation. Tissue samples of 20 buffaloes showing lesions suggestive of tuberculosis, from the municipalities of Macapá and Santana, were collected. The samples were divided into two parts: one was fixed in 10% buffered formalin and routinely processed for histopathological evaluation, stained by hematoxylin-eosin and Ziehl-Neelsen; and the other was used for Nested-PCRs for Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) and for Mycobacterium bovis. Gross lesions suggestive of tuberculosis were observed in the lungs, bronchial, mediastinic, retropharyngeal and submandibular lymph nodes, liver and pleura. Histopathologically, all samples showed lesions suggestive of tuberculosis, characterized by granulomas composed of large amount of infiltration of epithelioid cells, Langhans cells and lymphocytes, bordering a necrotic core, calcified or not, surrounded by a fibrous connective tissue capsule. Acid-fast bacilli were observed in the tissues of 3/20 (15%) buffaloes. With regards to the molecular detection, 13/20 (65%) buffaloes showed positive tissue samples: 6 were positive both in the MTC and M. bovis Nested-PCRs, one was positive only in the MTC Nested-PCR, and 6 were positive only in the M. bovis Nested-PCR. The results of this study demonstrate the importance of diagnosing TB in buffaloes in the region and point to the requirement to implement effective measures to control and eradicate the disease.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Pereira J.D.B., Cerqueira V.D., Bezerra Júnior P.S., Oliveira Bezerra D.K., Araújo F.R., Dias A.C.L., Araújo C.P. & Riet-Correa G. 2017. [Histopathological and molecular diagnosis of lesions suggestive of tuberculosis in buffaloes slaughtered in the municipalities of Macapá and Santana, Amapá state, Brazil.] Diagnóstico histopatológico e molecular de lesões sugestivas de tuberculose em búfalos abatidos nos municípios de Macapá e Santana, estado do Amapá. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(11):1198-1204. Universidade Federal do Pará, Rua Augusto Corrêa 1, Bairro Guamá, Castanhal, PA 66075-110, Brazil. E-mail: gabrielariet@pq.cnpq.br
Este estudo teve como objetivo avaliar lesões sugestivas de tuberculose em búfalos abatidos em matadouros oficiais no Estado do Amapá, Brasil, a fim de confirmar o diagnóstico de tuberculose por avaliação histopatológica e molecular. As amostras de tecido de 20 búfalos que apresentavam lesões sugestivas de tuberculose, dos municípios de Macapá e Santana, foram coletadas. As amostras foram divididas em duas partes: uma delas foi fixada em formalina a 10% tamponada e rotineiramente processadas para avaliação histopatológica, coradas pela hematoxilina-eosina e Ziehl-Neelsen; e o outra parte foi usado para Nested-PCR para o complexo de Mycobacterium tuberculosis (CMT) e para Mycobacterium bovis. As lesões macroscópicas sugestivas de tuberculose foram observadas nos pulmões, linfonodos brônquicos, mediastínicos, retrofaríngeos e submandibulares, fígado e pleura. Histopatologicamente, todas as amostras apresentaram lesões sugestivas de tuberculose, caracterizadas por granulomas compostos por grande quantidade de infiltração de células epitelióides, células de Langerhans e linfócitos, margeando um centro necrótico, calcificado ou não, rodeado por cápsula de tecido conjuntivo fibroso. Bacilos álcool-ácido resistentes foram observados nos tecidos de 3/20 (15%) búfalos. Com relação à detecção molecular, 13/20 (65%) bubalinos apresentaram amostras de tecidos positivos: 6 foram positivos nas Nested-PCRs para CMT e M. bovis, um foi positivo apenas na Nested-PCR para CMT, e 6 foram positivos apenas na Nested-PCR para M. bovis. Os resultados deste estudo demonstram a importância de diagnosticar a tuberculose em búfalos na região e apontam para a necessidade de implementar medidas eficazes para controlar e erradicar a enfermidade.
#9 - Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, 37(6):549-554
Abstract in English:
ABSTRACT.- Mayer F.Q., Reis E.M., Bezerra A.V.A., Rodrigues R.O., Michel T., Cerva C. & Bertagnolli A.C. 2017. Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(6):549-554. Laboratório de Biologia Molecular, Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Estrada Municipal do Conde 6000, Eldorado do Sul, RS 92990-000, Brazil. E-mail: bimmayer@gmail.com
Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis causing economic losses and public health risks in many countries. The disease diagnosis in live animals is performed by intradermal tuberculin test, which is based on delayed hypersensitivity reactions. As tuberculosis has complex immune response, this test has limitations in sensitivity and specificity. This study sought to test an alternative approach for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, based on real-time polymerase chain reaction (PCR). DNA samples, extracted from nasal swabs of live cows, were used for SYBR® Green real-time PCR, which is able to differentiate between Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complexes. Statistical analysis was performed to compare the results of tuberculin test, the in vivo gold standard bTB diagnosis method, with real-time PCR, thereby determining the specificity and sensitivity of molecular method. Cervical comparative test (CCT) was performed in 238 animals, of which 193 had suitable DNA from nasal swabs for molecular analysis, as indicated by amplification of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene, and were included in the study. In total, 25 (10.5%) of the animals were CCT reactive, of which none was positive in the molecular test. Of the 168 CCT negative animals, four were positive for M. tuberculosis complex at real time PCR from nasal swabs. The comparison of these results generated values of sensitivity and specificity of 0% and 97.6%, respectively; moreover, low coefficients of agreement and correlation (-0.029 and -0.049, respectively) between the results obtained with both tests were also observed. This study showed that real-time PCR from nasal swabs is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis; thus tuberculin skin test is still the best option for this purpose.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Mayer F.Q., Reis E.M., Bezerra A.V.A., Rodrigues R.O., Michel T., Cerva C. & Bertagnolli A.C. 2017. Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis. [A PCR em tempo real de swab nasal não é adequada para o diagnóstico in vivo de tuberculose bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(6):549-554. Laboratório de Biologia Molecular, Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Estrada Municipal do Conde 6000, Eldorado do Sul, RS 92990-000, Brazil. E-mail: bimmayer@gmail.com
A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose que causa perdas econômicas e riscos à saúde pública em muitos países. O diagnóstico da doença em animais vivos é realizado pelo teste intradérmico da tuberculina, que é baseado em reações de hipersensibilidade tardia. Como a tuberculose tem resposta imunológica complexa, este teste tem limitações em termos de sensibilidade e especificidade. Este estudo procurou desenvolver uma abordagem alternativa para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina, com base na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As amostras de DNA, extraídas de suabes nasais de vacas vivas, foram usadas para PCR em tempo real com SYBR® Green, capaz de diferenciar os complexos Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium. A análise estatística foi realizada para comparar os resultados de teste de tuberculina, padrão ouro para o diagnóstico in vivo da bTB, com PCR em tempo real, determinando-se assim a especificidade e sensibilidade do método molecular. O teste cervical comparativo (TCC) foi realizado em 238 animais, dos quais 193 tiveram DNA dos suabes nasais adequados para análise molecular, como indicado pela amplificação do gene gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), e foram incluídos no estudo. No total, 25 (10,5%) animais foram reativos no TCC, dos quais nenhum foi positivo no teste molecular. Dos 168 animais negativos no TCC, quatro foram positivos para o complexo M. tuberculosis na PCR em tempo real a partir dos suabes nasais. A comparação destes resultados gerou valores de sensibilidade e especificidade de 0% e 97,6%, respectivamente; além disso, baixos coeficientes de concordância e correlação (-0,029 e -0,049, respectivamente) entre os resultados obtidos com ambos os testes também foram observados. Este estudo mostrou que a PCR em tempo real a partir de suabes nasais não é adequada para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina; portanto, o teste da tuberculina ainda é a melhor opção para este fim.
#10 - Identification and genotyping of Mycobacterium bovis from positive cattle in skin test for tuberculosis in the State of Mato Grosso do Sul, Brazil, 35(2):141-147
Abstract in English:
ABSTRACT.- Cazola D.O., Jorge K.S.G., Zumárraga M.J., Souza-Filho A.F., Araújo F.R. & Osório A.L.A.R. 2015. [Identification and genotyping of Mycobacterium bovis from positive cattle in skin test for tuberculosis in the State of Mato Grosso do Sul, Brazil.] Identificação e genotipagem de Mycobacterium bovis em bovinos positivos no teste intradérmico para tuberculose em Mato Grosso do Sul. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(2):141-147. Laboratório de Micobacteriologia e Biologia Molecular, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Av. Senador Filinto Müller 2443, Campo Grande, MS 79074-460, Brazil. E-mail: danicazola@gmail.com
Spoligotyping was performed in the present study to genotype Mycobacterium bovis isolates obtained from tissues of cattle that were positive in the comparative intradermal tuberculin test (CITT) in the state of Mato Grosso do Sul (Brazil). Tissue samples from 13 positive cattle from different municipalities of the state were cultured using a Stonebrink medium. The resulting colonies were subjected to Ziehl-Neelsen staining and all isolates exhibited the staining characteristics of AFB. The 13 isolates of AFB were identified by means of a multiplex PCR (mPCR) assay. The hsp65 gene was targeted for the identification of Mycobacterium spp., whereas the IS6110 insertion sequence was targeted for the identification of the Mycobacterium tuberculosis complex (MTC) and the rvd1rv2031c region was explored for the detection of Mycobacterium bovis. The spoligotyping assay was performed to genotype mycobacterial isolates. Of the 13 cattle, seven had at least one lesion suggestive of tuberculosis in the retropharyngeal, parotid and lung lymph nodes or lung. The remaining six exhibited no lesions suggestive of the disease. In the mPCR, 11 of the 13 isolates (84.6%) were positive for Mycobacterium spp., 8/13 (61.5%) were positive for the MTC and 7/13 (53.8%) were positive for M. bovis. Based on the spoligotyping, eight isolates were grouped into three different groups of genotypes and one isolate exhibited an orphan type. Four isolates exhibited spoligotype pattern SB0121, while two isolates were associated with the pattern SB1145, another two were associated with pattern SB0881 and one was associated with pattern SB0140. Spoligotyping confirmed the genetic diversity present among isolates found in the state of Mato Grosso do Sul. In addition, SB0121 was confirmed as the predominant profile.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Cazola D.O., Jorge K.S.G., Zumárraga M.J., Souza-Filho A.F., Araújo F.R. & Osório A.L.A.R. 2015. [Identification and genotyping of Mycobacterium bovis from positive cattle in skin test for tuberculosis in the State of Mato Grosso do Sul, Brazil.] Identificação e genotipagem de Mycobacterium bovis em bovinos positivos no teste intradérmico para tuberculose em Mato Grosso do Sul. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(2):141-147. Laboratório de Micobacteriologia e Biologia Molecular, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Av. Senador Filinto Müller 2443, Campo Grande, MS 79074-460, Brazil. E-mail: danicazola@gmail.com
Neste estudo, realizou-se genotipagem de isolados de Mycobacterium bovis, provenientes de amostras de tecidos de bovinos positivos no teste cervical comparativo (TCC) para tuberculose em Mato Grosso do Sul, por meio da técnica de spoligotyping. Tecidos de 13 bovinos positivos, oriundos de diferentes municípios do estado, foram cultivados em meio de Stonebrink. As colônias resultantes foram submetidas à coloração de Ziehl-Neelsen e todos os isolados apresentaram características tintoriais de BAAR. Os 13 isolados de BAAR foram identificados por PCR multiplex (mPCR). O gene hsp65 foi alvo para identificação de Mycobacterium spp, a sequência de inserção IS6110 foi alvo para identificação de complexo Mycobacterium tuberculosis (CMT) e a região rvd1rv2031c foi explorada para detecção de M. bovis. Os isolados micobacterianos foram genotipados pela técnica de spoligotyping. Dos 13 bovinos, sete tinham pelo menos uma lesão sugestiva de tuberculose em linfonodos retrofaríngeos, parotídeos e pulmonares ou no pulmão, e em seis não foram encontradas lesões visíveis sugestivas da doença. Na mPCR, 11/13 (84,6%) isolados foram positivos para Mycobacterium spp; 8/13 (61,5%) positivos para CMT e 7/13 (53,8%) positivos para M. bovis. Com base no spoligotyping, oito isolados de BAAR foram agrupados dentro de três diferentes agrupamentos de genótipos e uma amostra remanescente apresentou perfil único, sendo quatro isolados com padrão de espoligotipo SB0121, dois SB1145, dois SB0881 e um SB0140. A técnica de spoligotyping demonstrou que há diversidade genética entre os espoligotipos presentes no estado de Mato Grosso do Sul, embora predomine o perfil SB0121.
